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兩種乙酰膽堿受體自身抗體檢測法比較:酶聯免疫法與放射免疫法

更新時間:2022-03-28點擊次數:2216


煙堿型乙酰膽堿受體自身抗體(AChR Ab)是重癥肌無力(MG)的重要血清學標志物,血清中AChR Ab的檢測對MG的診斷和治療有重要意義。本文比較了兩種測定AChR Ab的方法:放射免疫法(IPA)和酶聯免疫法(競爭ELISA)。


在本研究中,在83例MG患者血清中,76例血清在ELISA法中呈陽性 (陽性率92%),72例在IPA法中呈陽性 (陽性率87%);在193例對照血清(疾病對照組和健康對照組)中,191/193例(99%)呈陰性,2例其他自身免疫性疾病的患者血清呈陽性(在對照組中,ELISA法和IPA法的結果一致)。


RSR的AChR Ab競爭ELISA法與現有金標準-放射免疫法特異性相同,靈敏度更高。此外,競爭ELISA的精密度和操作特性使其適用于大批量和小批量樣品的常規測定。




入組樣本


1) MG疾病組:83例MG患者的血清(IPA檢測的AChR Ab濃度范圍在0.14到21 nmol/L 毒素結合量);


2)疾病對照組:93例其他自身免疫性疾病患者的血清(包括42例Graves病患者血清TSHR (TR Ab)自身抗體陽性,11例橋本甲狀腺炎患者血清甲狀腺過氧化物酶自身抗體(TPO Ab)和/或甲狀腺球蛋白自身抗體(Tg Ab)陽性,10例1型糖尿病(DM)患者血清谷氨酸脫羧酶自身抗體(GAD Ab)陽性,10例阿狄森氏病(AD)患者血清類固醇21-羥化酶自身抗體(21-OH Ab)陽性,10例類風濕關節炎(RF)患者血清類風濕因子(RFA)陽性,10例系統性紅斑狼瘡(SLE)患者血清雙鏈DNA自身抗體(dsDNA Ab)陽性)。


上述患者組的標志物中,除類風濕因子使用Behring試劑盒測定外,其他自身抗體均采用RSR公司的試劑盒檢測。


3)健康對照組:100例健康獻血者(HBD)的血清(美國,Golden West)。



結果

01   ELISA法和IPA法對比


總體而言,在MG疾病組的檢測上,兩種檢測方法(ELISA法和IPA法)的結果吻合良好(r=0.85, n=83, p<0.001)(圖1)。


圖1 ELISA和放射免疫法(IPA)AChRAb檢測結果的相關性分析。y=0.31510.0364x;r=0.85;n=83。(A) 全尺寸。(B) 局部放大圖。水平和垂直虛線分別顯示ELISA和IPA臨界值。


02   靈敏度分析


83例MG患者血清中有80例 (96%) 在一種或兩種檢測中均呈陽性。在83例MG患者血清中,76例血清在ELISA法中呈陽性 (陽性率92%),72例在IPA法中呈陽性 (陽性率87%)。與IPA法(n =72)相比,使用ELISA 法(n=76)檢測到更多的MG患者樣本呈AChRAb陽性(表1)。


表1 在83例MG組中IPA和ELISA法的檢測結果

ELISA 法的正常參考區間:抑制率≤ 16%
IPA法的正常參考區間:毒素結合量< 0.5 nmol/L


差異樣本分析:


ELISA陽性,IPA陰性:8例血清在ELISA法中呈陽性(抑制率范圍為18 ~ 46%),而在IPA法中呈陰性(0.33 ~ 0.47 nmol/L毒素結合量)。


ELISA陰性,IPA陽性:4例血清樣本在IPA法檢測中呈陽性(0.56、0.61、1.44和2.91 nmol/L毒素結合量),在ELISA檢測中呈陰性(抑制率分別為14%、15%、8%和-1%)。在4個血清樣本中,其中兩例的雙方法學檢測結果都處于臨界值附近;另外兩例在IPA結果中,為AChR Ab弱陽性值 (1.4 和2.9 nmol/L),這兩個樣本在IPA法檢測時被發現與胎兒型乙酰膽堿受體結合(數據未顯示),可能表明這兩個樣本中的AChR Ab結合到了我們ELISA實驗中使用的3種單抗無法識別的位點上。


03   特異性分析


在其他疾病對照組和健康對照組的檢測中,ELISA法和IPA法的定性結果始終保持一致。


其他疾病對照組:在93例其他自身免疫性疾病患者(詳情見前面入組樣本部分)中,91/93例(特異性 98%患者測結果為AChRAb陰性。兩例患者檢測結果為AChRAb陽性,分別為一例Graves病患者(ELISA法顯示28%抑制率,IPA法結果為1.3nmol/L 毒素結合量 )和一例系統性紅斑狼瘡(SLE)患者(ELISA法顯示44%抑制率,IPA結果為1.3nmol/L 毒素結合量)。


健康對照組:100例健康供血者中,100例(特異性 100%)均為抗體陰性。


03   批內和批間精密度分析


競爭法AChR Ab酶聯免疫吸附試驗的批間變異系數(CV)如下:



競爭法AChR Ab酶聯免疫吸附試驗的批間和批內變異系數(CV)結果顯示,低濃度樣本的批間和批內差大于高濃度的樣本,是由于低濃度樣本的平均值偏小,CV的計算公式為標準差除以平均值。


原文:Hewer R ,   Matthews I ,   Shu C , et al. A sensitive non-isotopic assay for acetylcholine receptor autoantibodies[J]. Clinica Chimica Acta, 2006, 364(1-2):159-166.



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