（一）指標(biāo)和方法學(xué)納入標(biāo)準(zhǔn)

《意見》中涉及的抗體綜合了專家委員會(huì)意見討論，均為國(guó)內(nèi)普遍使用、具有重要診斷價(jià)值的自身抗體以及衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)評(píng)涉及的自身抗體。參評(píng)方法學(xué)為國(guó)家藥品監(jiān)督管理局室間質(zhì)評(píng)涉及的、國(guó)內(nèi)已上市且廣泛使用的以及臨床文獻(xiàn)中的常見方法學(xué)。

（二）參考文獻(xiàn)證據(jù)級(jí)別評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參考文獻(xiàn)證據(jù)級(jí)別共5級(jí)：I級(jí)(最高證據(jù))，使用盲法的大樣本（≥200）隨機(jī)對(duì)照方法學(xué)研究及方法學(xué)薈萃分析；II級(jí)，使用盲法的小樣本（<200）隨機(jī)對(duì)照方法學(xué)研究，或未使用盲法的隨機(jī)對(duì)照方法學(xué)研究，或采用有效替代標(biāo)志物的隨機(jī)對(duì)照方法學(xué)研究；III級(jí)，應(yīng)用相應(yīng)方法的非隨機(jī)對(duì)照研究，觀察性（隊(duì)列）研究，病例對(duì)照研究或橫斷面研究；IV級(jí)，專家委員會(huì)或相關(guān)的意見；V級(jí)，專家意見。

（三）專家評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)

專家認(rèn)可度評(píng)分按Delphi評(píng)分進(jìn)行打分，0分表示非常不贊同，10分表示非常贊同（0-2分反對(duì)，3-4分不推薦，5-6分酌情推薦，7-8分推薦，9-10分強(qiáng)烈推薦）。統(tǒng)計(jì)后評(píng)分平均值<7分或未收到半數(shù)以上專家評(píng)價(jià)的指標(biāo)和對(duì)應(yīng)方法學(xué)視為抗體檢測(cè)方法學(xué)未形成共識(shí)予以排除。《意見》打分表發(fā)出48份，收回38份，有效38份。

自身抗體檢測(cè)方法專家認(rèn)可度評(píng)分和專家， 推薦

（內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病相關(guān)自身抗體）

《意見》中，對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病相關(guān)自身抗體包括甲狀腺疾病相關(guān)自身抗體、糖尿病相關(guān)自身抗體檢測(cè)的推薦方法，見下表。

甲狀腺疾病相關(guān)自身抗體：作用靶器官為甲狀腺，是自身免疫性甲狀腺疾病的重要診斷依據(jù)。

• 抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）：與抗甲狀腺球蛋白抗體聯(lián)合檢測(cè)是診斷自身免疫性甲狀腺炎的重要依據(jù)。建議采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）或酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）檢測(cè)。

   

• 抗甲狀腺球蛋白抗體：主要用于疑似橋本甲狀腺炎患者的診斷，常與TPOAb同時(shí)檢測(cè)，也可作為產(chǎn)后甲狀腺炎、無痛性Graves病等甲狀腺疾病診斷的參考指標(biāo)。建議檢測(cè)方法是CLIA或ELISA。

   

• 抗促甲狀腺激素受體抗體：是Graves病診斷標(biāo)志，靈敏度約為90%，特異度可達(dá)99%，并且抗體水平還可作為預(yù)后和治療的重要參考。建議采用CLIA、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）或ELISA檢測(cè)。

糖尿病相關(guān)自身抗體：識(shí)別胰島β細(xì)胞不同抗原成分，是評(píng)估胰島β細(xì)胞是否存在免疫損害及疾病診斷分型的重要指標(biāo)。

• 抗胰島細(xì)胞抗體（ICA）：用于確診1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）。ICA分析結(jié)果受不同的胰腺組織、標(biāo)記方法、孵育時(shí)間、濕度以及不同生物學(xué)家的解釋等因素影響波動(dòng)較大，因此ICA是檢測(cè)難度最大且方法學(xué)難以標(biāo)準(zhǔn)化的胰島自身抗體。建議選以靈長(zhǎng)類胰腺冰凍組織切片為基質(zhì)的間接免疫熒光法（IIFT）檢測(cè)，也可采用ELISA檢測(cè)。

   

• 抗酪氨酸磷酸酶（IA2）抗體：胰島自身免疫活動(dòng)的早期標(biāo)志物，可作為T1DM、成人隱匿性自身免疫性糖尿病（LADA）的血清學(xué)診斷指標(biāo)。抗IA2抗體的出現(xiàn)預(yù)示病情進(jìn)展迅速，對(duì)T1DM診斷、預(yù)測(cè)及治療監(jiān)控有重要臨床意義。建議采用CLIA、ELISA或放射免疫分析法（RIA）檢測(cè)。

   

• 抗谷氨酸脫羧酶（GAD）抗體：出現(xiàn)早且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，是診斷T1DM和LADA最敏感的免疫指標(biāo)，在年齡較大T1DM兒童患者和遲發(fā)型患者中多見，在神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病中也可起到輔助診斷的作用。GAD抗體水平在LADA患者中可反映病程及胰島素分泌功能的衰退情況，高抗體水平的LADA患者應(yīng)及早進(jìn)行胰島素治療以保留殘存β細(xì)胞功能。對(duì)T1DM、LADA擬診患者建議采用ELISA或線性免疫印跡（LIA）檢測(cè)。其中ELISA法檢測(cè)抗谷氨酸脫羧酶抗體的優(yōu)異性能擁有I級(jí)(最高證據(jù))數(shù)據(jù)支持。

   

  抗GAD抗體也可見于僵人綜合征患者體內(nèi)，靶抗原GAD是γ-氨基丁酸（GABA）合成的關(guān)鍵限速酶，主要表達(dá)于腦灰質(zhì)、胰島β細(xì)胞等組織和細(xì)胞中。除對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病有輔助診斷價(jià)值外，抗GAD抗體還是I型糖尿病的重要檢測(cè)指標(biāo)。由于僵人綜合征患者和部分小腦共濟(jì)失調(diào)患者的抗體水平顯著高于糖尿病患者，故高水平的抗GAD抗體對(duì)僵人綜合征等神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病的診斷有特殊意義。該抗體也見于部分患有邊緣性腦炎的胸腺瘤、小細(xì)胞肺癌患者。對(duì)擬診神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫病患者，建議采用以靈長(zhǎng)類小腦為基質(zhì)的IIFT篩查，使用ELISA或LIA確認(rèn)靶抗原。

   

• 抗胰島素抗體（IAA）是T1DM的免疫學(xué)指標(biāo)之一，在2型糖尿病（T2DM）患者中陽(yáng)性率較低，也見于部分甲狀腺疾病。建議采用CLIA或ELISA檢測(cè)，應(yīng)注意現(xiàn)有檢測(cè)方法不能區(qū)分疾病相關(guān)的IAA還是因注射外源性胰島素而產(chǎn)生的IAA。

對(duì)于GAD抗體檢測(cè)的來說，基于的設(shè)計(jì)原理不同，ELISA法試劑盒的性能會(huì)有差異。由佛羅里達(dá)大學(xué)牽頭開展的國(guó)際多中心自身免疫糖尿病抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目(ISAP)中，橋聯(lián)ELISA法的檢測(cè)性能*佳。雙抗原夾心橋聯(lián)ELISA法是傳統(tǒng)酶標(biāo)二抗間接ELISA法的升級(jí)，借助生物素-鏈霉親和素等信號(hào)放大系統(tǒng)和抗原空間位點(diǎn)的充分暴露，大大提高了對(duì)GAD65抗體的檢測(cè)靈敏度，使橋聯(lián)ELISA法可作為傳統(tǒng)放射免疫法的替代方案。

在另一項(xiàng)來自英國(guó)的隊(duì)列研究中，RSR的橋聯(lián)ELISA檢測(cè)試劑盒也實(shí)現(xiàn)了GAD65抗體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法的大幅升級(jí)：

該隊(duì)列研究納入了2006至2012年羅姆福德queen醫(yī)院和royal倫敦醫(yī)院兩家兒童糖尿病中心的316名兒童糖尿病患者，經(jīng)至少兩項(xiàng)自身抗體檢測(cè)后296名(93.7%)兒童確診為1型糖尿病。

在GAD抗體檢測(cè)中，2011年12月前入組患者使用實(shí)驗(yàn)室自建檢測(cè)法(ELISA和猴小腦切片間接免疫熒光），陽(yáng)性率分別為18.4%和13.8%。2012年1月改用RSR 橋聯(lián)ELISA法檢測(cè)試劑盒后，抗體陽(yáng)性率提升至66.7%。可見，RSR橋聯(lián) ELISA試劑盒的靈敏性遠(yuǎn)超實(shí)驗(yàn)室方法。

作為對(duì)2014 年版《自身抗體檢測(cè)在自身免疫病中的臨床應(yīng)用專家建議》的全面修訂，2020年版《推薦意見》涵蓋了內(nèi)分泌系統(tǒng)自身免疫疾病等多系統(tǒng)自身免疫疾病自身抗體的檢測(cè)方法學(xué)推薦，可作為臨床醫(yī)師和檢驗(yàn)人員選擇自身抗體檢測(cè)方法學(xué)的參考。以橋聯(lián)ELISA為代表的RSR產(chǎn)品除服務(wù)于甲狀腺自身免疫領(lǐng)域外，在自身免疫糖尿病領(lǐng)域已實(shí)現(xiàn)對(duì)傳統(tǒng)放射免疫法和實(shí)驗(yàn)室非標(biāo)準(zhǔn)化方法的全面替代，可作為內(nèi)分泌科特檢實(shí)驗(yàn)室和檢驗(yàn)科的高效選擇。

參考文獻(xiàn)：

1. 中國(guó)免疫學(xué)會(huì)臨床免疫分會(huì)專家組. 自身免疫病診斷中抗體檢測(cè)方法的推薦意見[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志 2020年43卷9期, 878-888頁(yè), ISTIC PKU CSCD CA, 2020.

2. 黃干, 楊濤, 劉煜, 等.   中國(guó)胰島自身抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃報(bào)告：檢測(cè)方法調(diào)查及準(zhǔn)確性評(píng)估 [J] . 中華糖尿病雜志,2016,8 (12): 723-728.

3. Perchard R, MacDonald D, Say J, et al. Islet autoantibody status in a multi-ethnic UK clinic cohort of children presenting with diabetes. Arch Dis Child. 2015;100(4):348-352.