鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8是β細(xì)胞*的跨膜蛋白，其位于胰島素分泌顆粒中，參考膜內(nèi)外鋅離子濃度的調(diào)節(jié)。因此鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8也成為了1型糖尿病重要的自身抗原。

一、前言

鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8自身抗體主要同鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8 C端結(jié)構(gòu)域結(jié)合，人群基因的多態(tài)性使第325氨基酸的密碼子可表達(dá)出三種蛋白質(zhì)：精氨酸（R）325，色氨酸（W）325，少數(shù)情況下表達(dá)為谷氨酰胺（Q）325。鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8自身抗體可以特異性識(shí)別R325、W325類，或識(shí)別非特異性殘基325，極少數(shù)情況下可與Q型結(jié)合。RSR公司鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8自身抗體檢測(cè)試劑盒可定量檢測(cè)R325、W325以及非特異性殘基325型自身抗體。檢測(cè)鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8抗體可與檢測(cè)谷氨酸脫羧酶抗體、胰島細(xì)胞抗原2抗體等項(xiàng)目形成互補(bǔ)。相比于檢測(cè)單種抗體，同時(shí)檢測(cè)多項(xiàng)抗體陽(yáng)性更具診斷價(jià)值。

二、材料與方法

1.材料

血清樣本，來(lái)源：

1）94例1型糖尿病患者（T1DM）；

2）51例成人隱匿型自免糖尿病患者（LADY）；

3）59例2型糖尿病患者（T2DM）包括28例初診斷及31例不同治療過(guò)程患者；

4）200名健康志愿者（HBD）；

5）30例格雷夫斯氏病患者；

6）20例阿狄森氏病患者。

2.方法

1）橋式ELISA法（RSR Ltd）

2）免疫沉淀分析法（immunoprecipitation assay，IPA）：35S標(biāo)記ZnT8抗原，抗原類型分W325/R325二聚體，W325，R325，P325單體。

3）GADAb ELISA試劑盒、IA-2Ab ELISA試劑盒、IAA放免試劑盒，試劑盒來(lái)自RSR Ltd。

三、研究結(jié)果

1. 精密度分析

用兩個(gè)質(zhì)控樣品（抗體濃度為50 ± 15 u/mL 和 210 ±50 u/mL）進(jìn)行批間（n=6）和批內(nèi)精密度(n=10)分析，中濃度ZnT8Ab批間和批內(nèi)精密度分別為7.1%和1.7%，高濃度ZnT8Ab批間和批內(nèi)精密度分別為8.5%和2.7%。

2. ZnT8抗體陽(yáng)性檢測(cè)率

用ELISA方法，ZnT8Ab陽(yáng)性檢出率分別為：T1DM 54.3%，LADA 31.4%，T2DM 1.7%。ZnT8Ab ELISA試劑盒檢測(cè)TIDM及健康人血清樣本，通過(guò)ROC分析，靈敏性為54%，特異性99%（cut-off 15U/ml），AUC為0.8（95%置信區(qū)間，0.74-0.86）。

3. 比較ELISA與IPA方法檢測(cè)ZnT8

抗體

T1DM患者中，ELISA為54.3%（51/94），IPA為50%（47/94）；LADA患者中，ELISA為31.4%（16/51），IPA為29.4%（15/51）； T2DM患者中，ELISA為1.7%（1/59），IPA為3.4%（2/59）；健康對(duì)照（HBD）中，特異性分別為ELISA 99%，IPA為96.5%。

4. 線性分析

線性分析中，陽(yáng)性質(zhì)控及血清樣本用陰性對(duì)照品進(jìn)行了1:2, 1:5, 1:10, 1:20的稀釋。所有樣品，ELISA檢測(cè)結(jié)果與IPA（W325/R325二聚體）檢測(cè)結(jié)果具有很好的一致性（r=0.856, k=0.889, n=204）。在1型糖尿病患者和LADA患者中的一致性（r=0.837, k=0.875, n=145）（圖4）。

5. 用多種不同的抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行分析

T1DM患者中，對(duì)多種抗體檢測(cè)，陽(yáng)性率分別為：ZnT8Ab 51/94（54.3%），GAD Ab 70/94(74.5%)，IA-2 Ab 42/94(44.7%)，IAA 24/94(25.5%)。至少一種方法檢測(cè)出陽(yáng)性概率統(tǒng)計(jì)為85.1%，僅ZnT8 Ab檢測(cè)陽(yáng)性概率為4.3%，ZnT8Ab使陽(yáng)性檢出率從80.9%上升至85.1%；

LADA患者中，GAD Ab全陽(yáng)性，ZnT8 Ab 16/51(31.4%)，IA-2 Ab 12/51(23.5%)， IAA 6/51(11.8%)；

28例新診斷T2DM患者中，GAD Ab檢測(cè)只有1例陽(yáng)性。在所有T2DM患者中（28例新診斷，31例不同時(shí)期），檢出陽(yáng)性患者數(shù)分別為ZnT8 Ab 1/59(1.7%)，GAD Ab 10/59(16.9%)， IA-2 Ab 2/59(3.4%)，IAA 2/59(3.4%)，至少一種抗體陽(yáng)性統(tǒng)計(jì)結(jié)果為13/59（22%），沒(méi)有ZnT8Ab單獨(dú)呈陽(yáng)性檢出者。

30例格雷夫斯氏病患者ZnT8 Ab ELISA檢測(cè)無(wú)陽(yáng)性，20例阿狄森氏病患者中ZnT8Ab ELISA檢測(cè)2例陽(yáng)性(23.6 和48.2 U/mL)，對(duì)陽(yáng)性（23.6 U/ mL）血清用GADAb及IAA檢測(cè)也成陽(yáng)性，IA-2Ab呈陰性。另一例ZnT8 Ab ELISA檢測(cè)陽(yáng)性（48.2 U/mL）因血清不足未能檢測(cè)。

四、結(jié)論

橋式ELISA是一種簡(jiǎn)單且可重復(fù)的檢測(cè)血清ZnT8Ab的方法，可提高成人1型糖尿病的抗體陽(yáng)性檢出率。
 

參考文獻(xiàn)：Dunseath G, Ananieva-Jordanova R, Coles R, et al. Bridging-type enzyme-linked immunoassay for zinc transporter 8 autoantibody measurements in adult patients with diabetes mellitus[J]. Clinica Chimica Acta, 2015, 447: 90-95.